Vitamin B12 ELISA Kit

اهمیت بالینی

B12 یک ویتامین محلول در آب است که در طیف وسیعی فرایندهای فیزیولوژیک نقش دارد. دخالت در تشکیل گلبول های قرمز خون و همچنین تشکیل غلاف میلین در اطراف بافت عصبی از جمله مهمترین نقش های این ویتامین هستند. ویتامین B12 معمولاً از منابع غذایی حیوانی تأمین می گردد. سالمندان و افرادی که گیاه خوار هستند در معرض خطر کمبود این ویتامین قرار دارند. نتایج حاصل از اندازه گیری همزمان سطح متيل مالونيل CoA و هوموسیستئین نیز در تشخیص افتراقی کمبود ویتامین B12 از کمبود فولات به کار برده می شوند. کمبود ویتامین B12 و فولات هر دو دارای علائم بالینی مشابهی شامل افزایش مقدار هوموسیستئین هستند. با این وجود، تنها در کمبود ویتامین B12 افزایش سطح متیل مالونیل COA رخ می دهد. حیطه کاربرد این کیت اندازه گیری سطح ویتامین B12 در نمونه های سرم به روش الایزا می باشد.

اصول آزمایش

این آزمایش براساس الایزای رقابتی طراحی شده است. در این روش نمونه ها، کالیبراتورها و کنترل ها به همراه کونژوگه بیوتینی به چاهک های حاوی استرپتاویدین تثبیت شده اضافه می شوند. پس از اتصال ویتامین B12 به آنتی بادی بیوتینیله، کونژوگه آنزیمی (ویتامین B12 متصل به آنزیم (HRP) اضافه می شود. رقابت بین آنتی ژن کونژوگه و آنتی ژن نمونه برای اتصال به جایگاه های محدود آنتی بادی ها که در زمان انکوباسیون اول واکنش نداده اند، ایجاد می شود. پس از شستشو و حذف ترکیبات متصل نشده، با اضافه کردن محلول رنگزا (سوبسترای آنزیم HRP) و سپس محلول متوقف کننده محصول نهایی تولید می شود که بیشترین جذب نوری را در طول موج 450 نانومتر دارد. میزان رنگ ایجاد شده و در نتیجه شدت جذب نوری در هر چاهک با غلظت ویتامین B12 موجود در سرم و کالیبراتورها ارتباط معکوس دارد. در نهایت غلظت این ویتامین در نمونه ها به کمک منحنی استاندارد محاسبه می گردد.

محتویات کیت 96 تستی:

- کالیبراتورهای 0.75 میلی لیتری: شامل 6 ویال کالیبراتور با غلظت های 0، 100، 200، 400، 1000 و 2000 pg/mL تهیه شده از سرم انسان
- محلول کونژوگه آنزیمی (Vitamin B12 Enzyme Conjugate) 6 میلی لیتری: یک ویال شامل آنتی ژن متصل به آنزیم HRP در بافر
- محلول کونژوگه بیوتینی (Vitamin B12 Biotin Conjugate) 6 میلی لیتری: یک ویال شامل محلول آنتی بادی متصل به بیوتین در بافر
- معرف آزادکننده (Vitamin B12 Releasing Agent) 13 میلی لیتری: یک ویال حاوی معرف آزادکننده که ویتامین B12 را از پروتئین های اتصالی آزاد می کند.
- پلیت 96 تستی: یک پلیت حاوی استرپتاویدین تثبیت شده که به همراه رطوبت گیر در کیسه آلومینیومی بسته بندی شده است.
- محلول شستشو غلیظ (Wash Buffer-50X) بیست میلی لیتری: یک ویال شامل سورفاکتانت محلول شده در بافر فسفات
- محلول پایدارکننده (Vit B12 Stabilizing Agent): یک ویال 0.75 میلی لیتری
- بافر خنثی کننده (Vit B12 Neutralizing Buffer): یک ویال 6 میلی لیتری
- محلول سوبسترا (Substrate Solution) به حجم 12 میلی لیتر: یک ویال حاوی محلول تترا متیل بنزیدین (TMB) و محلول هیدروژن پراکساید (H2O2) در بافر
- محلول متوقف کننده (Stop Solution) به حجم 12 میلی لیتر: یک ویال حاوی محلول متوقف کننده واکنش
- سرم کنترل سطح یک (Vitamin B12 Control): ویال های حاوی 5.0 میلی لیتر سرم کنترل سطح یک
- سرم کنترل سطح دو (Vitamin B12 Control): ویال های حاوی 5.0 میلی لیتر سرم کنترل سطح دو
- برچسب مخصوص پلیت: یک ورق